紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

紫外检测器在液相色谱仪检测中的应用

    紫外检测器是液相色谱仪中应用最广泛的检测器，当检测波长范围包括可见光时，又称为紫外-可见检测器。紫外吸收检测器不仅灵敏度高、噪音低、线性范围宽、有较好的选择性，而且对环境温度、流动相组成变化和流速波动不太敏感，因此可用于对光吸收小、消光系数低的物质进行微量分析。既可用于等度洗脱，也可用于梯度洗脱。紫外检测器对流速和温度均不敏感，可于制备色谱。其中要注意流动相中各种溶剂的紫外吸收截止波长，如果溶剂中含有吸光杂质，则会提高背景噪音，降低灵敏度。此外，梯度洗脱时，还会产生漂移。

    紫外检测器的工作原理是：当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。可用公式表示为：A＝lg＝lg＝ECL（式中I0为入射光强度，I为透射光强度，T为透光率，E为吸收系数）。其依据是光吸收定律，从光源发出的光经狭缝、滤光片、样品池到光电培增管上，使束由于样品浓度不同所引起光强的变化转换成光电流的变化，此光电流经放大器输入到对数转换器，使透光率T转成A输出。根据上式就知测出了A，就知样品浓度C。若从放大器直接输入记录仪，绘出的是样品透光率T变化的图谱，若从对数转换器输入到记录仪绘出的是样品光密度A变化的图谱。

    紫外检测器分为固定波长检测器、可变波长检测器和光电二极管阵列检测器。按光路系统来分，紫外检测器可分为单光路和双光路两种。可变波长检测器又可分单波长（单通道）检测器和双波长（双通道）检测器。PDAD是80年代出现的一种光学多通道检测器，它可以对每个洗脱组分进行光谱扫描，经计算机处理后，得到光谱和色谱结合的三维图谱。其中吸收光谱用于定性（确证是否是单一纯物质），色谱用于定量。常用于复杂样品（如生物样品、中草药）的定性定量分析。

    在使用紫外检测器分析检测注意事项以下以保证检测器的灵敏度。

   1. 氘灯的光强受温度和电压影响较大，建议在恒温室内工作或者在冰库里工作；

   2. T调零生产时机内已校准，当更换光电培增管后，需重新校准；

   3. 氘灯寿命可达数千小时，若发现记录仪不能调到10mV，且基线一直往小的方向漂移要考虑换灯。如氘灯不亮可再按一次电源开关，氘灯就会即亮，光电培增管寿命在数千小时以上。注意开机工作时不得拿出样品池架，以免强光照射光电培增管造成损坏。氘灯发光区域和光电培增管光阴极窗口沾污时，可用干净棉芯酒精擦拭干净。

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